यसको कार्य विधि भनेको संवेदनशील सूक्ष्मजीवहरूको 30S राइबोसोमल सबयुनिटमा बाँधिएर प्रोटीन संश्लेषणलाई रोक लगाउनु हो।
अक्सिटेट्रासाइक्लिन, यसरी
राइबोसोम र एमिनोएसिल-टीआरएनए बीचको सम्बन्धलाई रोक्छ। यो पनि विश्वास गरिन्छ कि अक्सिटेट्रासाइक्लिनले ५०एस राइबोसोमसँग उल्टो सम्बन्ध राख्छ र संवेदनशील सूक्ष्मजीवहरूको साइटोप्लाज्मिक झिल्लीको पारगम्यतालाई परिवर्तन गर्छ। उच्च सांद्रतामा अक्सिटेट्रासाइक्लिनले कोशिकाहरूमा प्रोटीन संश्लेषणलाई पनि रोक्न सक्छ।